leuchtpilz hat geschrieben:Können Kontis (Sporen,...) in den Petris überleben wenn ich das Agar entfernt und die Petris mit kochendem Wasser übergieße und anschließend in der Spülmaschine reinige? Oder gehen die spätestens nach dem Agar gießen beim sterilisieren kaputt?
Nein, bei der Sterilisation im DDKT geht alles kaputt. Kochendes Wasser und Spülmaschine sind gar nicht nötig.
Laß uns die Flüssigkultur mal ignorieren, bis deine Kontiprobleme gelöst sind.
leuchtpilz hat geschrieben:Ich desinfiziere meine Glovebox +/- 15 Minuten bevor ich damit arbeite. Ich besprühe das Innere mit 70%igen Isopropylalkohol. Zusätzlich desinfiziere ich damit die Handschuhe und sprühe auch in die Luft um Kontis aus der Luft zu holen. Nach 15 Minuten lege ich mein Arbeitsmaterial mit desinfizierten Händen in die Box. Ich desinfiziere erneut alles und verteile das Material mit den Handschuhe in der Box.
Gut, ich hoffe du wartest dann nochmal, bis sich der Staub abgesetzt hat.
leuchtpilz hat geschrieben:Außerhalb der Impfbox erhitze ich das Skalpell (Impfösen,...) bis es glüht mit einem Crème brûlée Brenner. Ich warte dann bis das Skalpell nicht mehr glüht und lege es dann in die Impfbox. Dort lasse ich es liegen bis es nicht mehr zu heiß ist, damit das Mycel nicht abstirbt. In der Zwischenzeit entferne ich die Frischhaltefolie mit denen die Glaspetrischalen fest umwickelt sind. Dann versprühe ich erneut Alkohol in der Luft. Anschließend schneide (oder wie du es mir gesagt hast: reiße ) ich den Champignon auf und schneide ein kleines Stück heraus.
Auch gut.
leuchtpilz hat geschrieben:Dieses lege ich dann in die Petrischale, welche ich nur kurz auf der Seite anhebe.
Sehr gut! Durch diesen Trick müßte es eigentlich auch ohne Impfbox klappen.
leuchtpilz hat geschrieben:Ich hatte auch schon versucht das Skalpell in 3%igem Wasserstoffperoxid zu desinfizieren bevor ich das Mycel herausschneide und dann das Mycel vor dem impfen auch in 3%iges H2O2 getaucht.
Überflüssig, da die Kontis nicht vom Skalpell und nicht vom Pilzgewebe kommen können.
leuchtpilz hat geschrieben:Wenn ich fertig bin desinfiziere ich meine Hände. Dann öffne ich kurz die Impfbox um die Petrischale zu entnehmen. Diese desinfiziere ich wieder. Wenn sie noch nass vom Alkohol aus der Box ist verreibe ich diesen mit einem Küchenpapier. Dann verschließe ich die Petrischale mit Frischhaltefolie.
Hm, das Küchenpapier würde ich nicht einsetzen, das ist meist voller Kontis und hinterläßt Partikel, auf denen später Schimmel wachsen kann. Bedenke, daß der Alkohol keine Sporen abtötet.
leuchtpilz hat geschrieben:Die Petris lagern bei Zimmertemperatur und im Dunkeln auf einem Regal.
Vielleicht in einer Box zusammen mit anderen Ansätzen? Oder stehen da womöglich Zimmerpflanzen oder alte Brutgläser in der Nähe?
Bei deiner Impfbox und der Arbeitsweise müßte es eigentlich besser funktionieren, besonders wenn du schon erfolgreich mit anderen Pilzarten gearbeitet hast.
Neben staubiger Luft oder einer völlig schimmelverseuchten Impfbox fällt mir noch eine mögliche Ursache ein. Als meine Kontirate mal von unter 5% auf über 95% hochschnellte, waren Milben die Ursache. Die waren huckepack auf Trauermücken eingewandert, hatten es sich in alten Brutgläsern breitgemacht und dann alles versaut, was in der Nähe stand. Die sind nur schwer zu erkennen, höchstens bei seitlicher Beleuchtung, dann sieht man, daß sich ein paar Staubkörner langsam bewegen. Wenn irgendwo Wasser kondensiert, ziehen sie erkennbare Spuren durch die Wassertröpfchen und auf dem Agar sind die Kontis auch meist in wirren Spuren angeordnet.
Hast du vielleicht ein Foto von einer kontaminierten Petri?
Mehr fällt mir leider nicht dazu ein.
Gruß, Carsten